Borna66
07-06-2009, 02:24 PM
طرز تهيه كلي محيط هاي كشت :
همانطوريكه مي دانيد محيطهاي كشت به سه دسته جامد ، نيمه جامد ، مايع تقسيم مي شوند . محيطهاي مايع معمولاً فاقد آگار هستند يا مقدار آگارشان بسيار كم است . مثلاً حدود ( 2/0%) و محيط هاي نيمه جامد داراي مقدار كمي آگار حدود 3- 2 گرم وبالاخره محيط هاي جامد كه داراي 15- 13 گرم آگار در ليتر محيط هستند .
براي ساختن محيط هاي كشت باكتري، ما از پودر مخصوص كه در شيشه هاي مربوطه قرار دارد، استفاده مي كنيم. در روي اين شيشه ها تركيب محيط بطور كامل و همچنين طرز ساختن آن نوشته شده است . مثلاً براي ساختن نوترينت آگار ابتدا مقدار لازم از پودر آن را وزن كرده ودر مقدار معيني آب مقطر كه قبلاً در يك ارلن ماير يا بطري ريخته ايد اضافي نموده و آنرا كاملاً حل نمائيد وسپس با پنبه درب ارلن ماير را مسدود كرده و آن را روي سه پايه چراغ گازي حرارت مي‌دهيد ، تا زمان جوشيدن آنرا چند بار تكان دهيد تا خوب حل شود و بمدت يك دقيقه بجوشد پس از آنكه مايع بجوش آمد ، آنرا برداشته وبا تكه كاغذ آلومينيومي روي پنبه را مي‌پوشانيد وظرف را در اتوكلاو مي‌گذاريد تا در فشار 15 پاند بر اينچ مربع و حرارت 121 درجه سانتيگراد به مدت 15 دقيقه استريل شود . بعد از استريل كردن بگذاريد تا خنك شود تا حدود c450- 40 . سپس در حاليكه ارلن را در دست راست گرفته و پنبه آنرا با دست چپ كنار شعله خارج كرده‌ايد ، دهانه ارلن را يكبار از درون شعله گاز عبور دهيد وبعد درون پليت هاي استريل شده بين cc20- 15 از محل محلول بريزيد . بعد پليت ها را در كناري بگذاريد تا سرد شوند وازتكان دادن آن خودداري نمائيد وپس از جامد شدن محيطهاي كشت نوترينت آگار را جمع كرده ودر c370 بمدت 24 ساعت قرار دهيد . اگر محيط ها آلوده نشده باشند آنها را از c370 بيرون آورده و در يخچال 4 درجه سانتي گراد قرار مي‌دهيد .
طرز ساختن ساير محيطهاي كشت، همينطور مي‌باشد منتهي بعضي از محيطهاي جامد در لوله مستقيم، پس از جوشاندن ريخته شده و بعد استريل مي‌شوند كه اين محيطها را پس از استريل شدن، به طور ايستاده مي‌گذاريم مثل محيط SIM و يا كج مي‌گذاريم مثل محيط TSI تا سرد شوند .
براي ساختن محيط مايع (براث) پس از جوشاندن، محيط را در لوله ها تقسيم مي‌كنيم و سپس با پنبه‌اي درب آنها را مسدود كرده و جهت استريل داخل اتوكلاو قرار مي‌دهيم .
همانطوريكه مي دانيد محيطهاي كشت به سه دسته جامد ، نيمه جامد ، مايع تقسيم مي شوند . محيطهاي مايع معمولاً فاقد آگار هستند يا مقدار آگارشان بسيار كم است . مثلاً حدود ( 2/0%) و محيط هاي نيمه جامد داراي مقدار كمي آگار حدود 3- 2 گرم وبالاخره محيط هاي جامد كه داراي 15- 13 گرم آگار در ليتر محيط هستند .
براي ساختن محيط هاي كشت باكتري، ما از پودر مخصوص كه در شيشه هاي مربوطه قرار دارد، استفاده مي كنيم. در روي اين شيشه ها تركيب محيط بطور كامل و همچنين طرز ساختن آن نوشته شده است . مثلاً براي ساختن نوترينت آگار ابتدا مقدار لازم از پودر آن را وزن كرده ودر مقدار معيني آب مقطر كه قبلاً در يك ارلن ماير يا بطري ريخته ايد اضافي نموده و آنرا كاملاً حل نمائيد وسپس با پنبه درب ارلن ماير را مسدود كرده و آن را روي سه پايه چراغ گازي حرارت مي‌دهيد ، تا زمان جوشيدن آنرا چند بار تكان دهيد تا خوب حل شود و بمدت يك دقيقه بجوشد پس از آنكه مايع بجوش آمد ، آنرا برداشته وبا تكه كاغذ آلومينيومي روي پنبه را مي‌پوشانيد وظرف را در اتوكلاو مي‌گذاريد تا در فشار 15 پاند بر اينچ مربع و حرارت 121 درجه سانتيگراد به مدت 15 دقيقه استريل شود . بعد از استريل كردن بگذاريد تا خنك شود تا حدود c450- 40 . سپس در حاليكه ارلن را در دست راست گرفته و پنبه آنرا با دست چپ كنار شعله خارج كرده‌ايد ، دهانه ارلن را يكبار از درون شعله گاز عبور دهيد وبعد درون پليت هاي استريل شده بين cc20- 15 از محل محلول بريزيد . بعد پليت ها را در كناري بگذاريد تا سرد شوند وازتكان دادن آن خودداري نمائيد وپس از جامد شدن محيطهاي كشت نوترينت آگار را جمع كرده ودر c370 بمدت 24 ساعت قرار دهيد . اگر محيط ها آلوده نشده باشند آنها را از c370 بيرون آورده و در يخچال 4 درجه سانتي گراد قرار مي‌دهيد .
طرز ساختن ساير محيطهاي كشت، همينطور مي‌باشد منتهي بعضي از محيطهاي جامد در لوله مستقيم، پس از جوشاندن ريخته شده و بعد استريل مي‌شوند كه اين محيطها را پس از استريل شدن، به طور ايستاده مي‌گذاريم مثل محيط SIM و يا كج مي‌گذاريم مثل محيط TSI تا سرد شوند .
براي ساختن محيط مايع (براث) پس از جوشاندن، محيط را در لوله ها تقسيم مي‌كنيم و سپس با پنبه‌اي درب آنها را مسدود كرده و جهت استريل داخل اتوكلاو قرار مي‌دهيم .